爱问共享资料酶促反应动力学实验报告文档免费下载，数万用户每天上传大量最新资料，数量累计超一个亿 ，酶促反应动力学实验报告14301050154杨恩原实验目的1观察底物浓度对酶促反应速度的影响2观察抑制剂对酶促反应速度的影响3掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理一底物浓度对酶促反应速度的影响在温度pH及酶浓度恒定的条件下底物浓度对酶的催化作用有很大的影响在一般情况下当底物浓度很低时酶促反应的速度v随底物浓度[S]的增加而迅速增加但当底物浓度继续增加时反应速度的增加率就比较小当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值即最大速度Vmax底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示Michaelis-Ment...
酶促反应动力学实验 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 14301050154杨恩原实验目的1观察底物浓度对酶促反应速度的影响2观察抑制剂对酶促反应速度的影响3掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理一底物浓度对酶促反应速度的影响在温度pH及酶浓度恒定的条件下底物浓度对酶的催化作用有很大的影响在一般情况下当底物浓度很低时酶促反应的速度v随底物浓度[S]的增加而迅速增加但当底物浓度继续增加时反应速度的增加率就比较小当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值即最大速度Vmax底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示Michaelis-Menten方程即式中Vmax为最大反应速度Km为米氏常数[S]为底物浓度当vVmax2时则Km[
S]Km是酶的特征性常数测定Km是研究酶的一种重要方法但是在一般情况下根据实验结果绘制成的是直角双曲线难以准确求得Km和Vmax若将米氏方程变形为双倒数方程Lineweaver-Burk方程则此方程为直角方程即以1V和1[S]分别为横坐标和纵坐标将各点连线在横轴截距为-1Km据此可算出Km值本实验以碱性磷酸酶为例测定不同浓度底物时的酶活性再根据1v和1[S]的倒数作图计算出其Km值二抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性甚至使酶完全丧失活性的物质成为酶的抑制剂酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大但对酶促反映的最大速度Vm
ax值无影响非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[S]与酶的结合故其Km值不变然而却能降低其最大速度Vmax本实验选取Na2HPO4作为碱性磷酸酶的抑制物确定其抑制作用属于哪种类型实验步骤实验一底物浓度对酶促反应速度的影响1取试管9支将001molL基质液稀释成下列不同浓度2另取9支试管编号做酶促反应3混匀37℃水浴保温5分钟左右4加入酶液后立即计时各管混匀后在37℃准确保温15分钟5保温结束立即加入05molLNaOH10ml以中止反应各管分别加入034-氨基安替比林10ml及05％铁氰化钾20ml6充分混匀放置10分钟以管1为对照于波长510nm处比色读取各管吸光度做MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1716040259630_2酶活性计算及Km值计算实验计算1在37°C下
保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位从 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线查出释放的酚量ug以此计算处各管的酶活性v2以1v为纵坐标1S为横坐标在坐标纸上作图求出酶的Km值Y00581X00242Km2401实验二抑制剂对酶促反映的影响1取试管9支将001molL基质液稀释成下列不同浓度2另取试管9支做酶促反应3混匀37℃水浴保温5分钟左右4加入酶液后立即计时各管混匀后在37℃准确保温15分钟5保温结束立即加入05molLNaOH10ml以中止反应各管分别加入034-氨基安替比林10ml及05％铁氰化钾20ml6充分混匀放置10分钟以管1为对照于波长510nm处比色读取各管吸光度并计算各管酶活性实验计算以酶活性单位v的倒数1v为纵坐标以底
物浓度[S]的倒数1S为横坐标在方格纸上描点并连接各点求该酶的Km值并与前面未加入抑制剂时测出的Km值作比较Y00832X0024Km347实验分析通过绘图及分别计算无抑制剂与有抑制剂时酶的Km值可发现此抑制剂为竞争性抑制剂通过绘图发现其两条以1v为纵坐标1S为横坐标的直线截距几乎相同而加入抑制剂后酶的Km值更大此为竞争性抑制剂的特征Vmax不变Km变大思考题一除了双倒数作图外你能举出其它能将酶动力学数据做出直线图的方法吗1海涅斯-沃尔弗作图法Hanes-Wolffplot双倒数方程式两边同时乘以[S]直线的斜率等于1Vmax横轴截距为-Km2伊迪-霍夫斯蒂作图法Eadie-Hofsteeplot米氏方程式两边均除
以[S]直线的斜率为-Km直线的纵轴截距为Vmax二为什么进行此种酶动力学测定时所用各底物浓度不是按等差递增在酶浓度和其他反应条件不变的情况下反应速率V对底物浓度[S]作图呈矩形双曲线当底物浓度较低时反应速率与底物浓度成正比反应为一级反应随着底物浓度的增高反应速率不再成正比例加速反应为混合级反应当底物浓度高达一定程度酶被底物所饱和反应速率不再增加达最大速率反应为零级反应三酶动力学实验中哪些因素需严格控制1配制的各种试剂及反应液必须混匀2加酶液要准确快速以保证各管酶促反应同时开始3加入酶液后要立即计时计时要准确4034-氨基安替比林10ml及05％铁氰化钾20ml要依次加入充分混匀放置10分钟放置时间不可过长
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